每个Vectorlabs的HRP Antibody All-in-One Conjugation Kit提供了抗体标记HRP所需的所有必要成分。该试剂盒需要用户提供100ug的抗体。这种独特试剂盒的成分包括一个预激活的高活性辣根过氧化物酶(> 250U/mg)和一个新型的Q旋滤器,以高产纯化产物。不含残留抗体和辣根过氧化物酶,因此在您的检测中提供最大的信噪比。任何适当纯化的单克隆或多克隆抗体(无论IgG亚类如何)都可以在5小时内(约1小时动手操作)结合和纯化。
All‐in‐OneTM conjugation kits是基于Solulink的HydraLinkTM化学。这种化学反应包括芳香肼与芳香醛反应形成稳定的腙键。HydraLinKTM结合非常有效,可以将100%的抗体转化为结合物形式。苯胺提高了温和反应条件下共轭物形成的速率和效率;导致游离抗体定量转化为辣根过氧化物酶偶联物。
图1. HRP Antibody All‐in‐OneTM 试剂盒标记原理
抗体完全转化为HRP缀合物大大简化了下游纯化。纯化包括选择性地将缀合物结合到一种新型的Q旋滤膜上,该滤膜允许过量的辣根过氧化物酶自由流动。自旋过滤器提供高纯度而不牺牲共轭产率。用All‐in‐OneTM kit标记上的缀合物可与所有下游分析实验兼容,如WB、ELISAs或IHC等。每个试剂盒提供足够的试剂来进行2个偶联反应;每个产生50‐70 ug高纯度HRP标记的抗体缀合物。
图2. HRP Antibody All‐in‐OneTM 试剂盒标记过程
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