Jackson精品推荐——Anti-Human IgE Antibodies
Jackson lmmunoResearch推出一系列适用于诊断试剂研发的Mouse Monoclonal Anti-Human IgE antibodies（小鼠抗人IgE单克隆抗体），补充了Jackson现有的抗人lgG、IgM和lgA抗体产品，抗人IgE可与一系列特定的报告分子偶联（如碱性磷酸酶和生物素），使其具有极强的灵敏度。
Jackson ImmunResearch Anti-Human IgE
Jackson ImmunoResearch可提供两个不同克隆号（ME.114和ME.10A10）的抗人IgE抗体，均为小鼠来源的单克隆抗体，与人lgE反应，并且是ε链特异的。
小鼠抗人IgE（Clone: ME.114, Cat#209-002-241）可与一系列报告分子偶联，并可在多种实验应用中检测人IgE，如ELISA、侧向免疫层析、流式细胞术、WB和化学发光免疫分析（CLIA）。
小鼠抗人IgE（Clone: ME.10A10，Cat#209-002-244）是未标记的纯化抗体，在夹心法检测中可作为捕获抗体与标记的抗人IgE抗体（Clone: ME.114）配对使用。
产品信息
标记类型 | 产品名称 | 产品货号 | 规格 |
Unconjugated | IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114) | 209-002-241 | 0.1 mg |
IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (10A10) | 209-002-244 | 0.1 mg |
Horseradish Peroxidase | Peroxidase IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114) | 209-032-241 | 0.5 ml |
Alkaline Phosphatase | Alkaline Phosphatase IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114) | 209-052-241 | 0.5 ml |
Biotin-SP (long spacer) | Biotin-SP (long spacer) IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114) | 209-062-241 | 0.25 ml |
Fluorescein (FITC) | Fluorescein (FITC) IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114) | 209-092-241 | 0.25 mg |
R-Phycoerythrin | R-Phycoerythrin IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114) | 209-112-241 | 0.1 ml |
40 nm Colloidal Gold | 40 nm Colloidal Gold IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114) | 209-402-241 | 1 ml |
特异性
Jackson ImmunoResearch抗人IgE ε链特异性抗体已通过ELISA测试，结果显示该抗体对人IgG、IgM或IgA具有最小的交叉反应性。图1为验证抗人IgE抗体（Clone: ME.114和ME.10A10）特异性的WB结果图，结果显示未检测到其他类型的免疫球蛋白信号。Jackson未测试是否可以检测到其他物种的免疫球蛋白。
图1.
A. 直接蛋白印迹显示Anti-Human IgE antibody(ME.114)对人IgE的特异性。每孔分别上样2ug纯化的人免疫球蛋白（IgE、IgG、IgA和IgM）。SDS-PAGE在非还原条件下进行，并将蛋白质印迹到硝化纤维素膜上。用含5%BSA的PBS/T封闭，并用HRP标记的Anti-Human IgE（Cat#209-032-241）以1:10000稀释孵育，使用ECL显色。
B. 间接蛋白印迹显示Anti-Human IgE antibody (10A10)抗人IgE（Clone: ME.10A10）对人IgE的特异性。每孔分别上样250ng纯化的人免疫球蛋白（IgE、IgG、IgA和IgM）。SDS-PAGE在非还原条件下进行，并将蛋白质印迹到硝化纤维素膜上。用含5%BSA的PBS/T封闭，2ug/mL的Anti-Human IgE（Cat#209-002-244）孵育。PBS/T洗涤后，用HRP标记的抗小鼠IgG（Cat#715-035-150）以1:10000稀释孵育，使用ECL显色。
图2.
A. 在还原和非还原条件下使用Anti-Human IgE (clone number ME.114)检测100ng纯化人IgE的WB结果。
B. 在还原和非还原条件下使用Anti-Human IgE (clone number 10A10)检测100ng纯化人IgE的WB结果。
注：抗人IgE（Clone: ME.114）和抗人IgE（Clone: ME.10A10）对还原IgE表现出较弱的信号，因此不建议两者用于检测还原IgE。
灵敏度
Jackson ImmunoResearch抗人IgE抗体检测各种来源的人IgE均具有优异的灵敏度。图3展示了Anti-Human IgE (clone number ME.114)在间接ELISA中检测两种不同浓度IgE包被板的灵敏度。图4展示了Anti-Human IgE（Clone: ME.114）在间接ELISA中检测不同骨髓瘤和血浆来源纯化IgE的灵敏度。
图3：间接法ELISA检测人IgE。每孔加入100ul含2或0.2ug/ml的人血浆中纯化的IgE的碳酸盐包被缓冲液进行包被，4℃过夜。每孔加入300ul含1%BSA（Cat#001-000-161，不含IgG、蛋白酶）的PBS/T封闭2小时。用PBS/T将一抗Anti-Human IgE（Cat#209-002-244）以1:3在板上连续稀释，并在室温下孵育2小时。二抗Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (min X Hu, Bov, Hrs Sr Prot)（Cat#115-035-071），用PBS/T中以1:20000稀释，孵育1.5小时。加入TMB 30分钟后在620nm处读数。
图4：间接法ELISA检测不同来源的人IgE。每孔加入100ul含2ug/ml纯化人IgE的碳酸盐包被缓冲液进行包被，4℃过夜。每孔加入300ul含1%BSA（Cat#001-000-161）的PBS/T在室温下封闭2小时。用PBS/T将一抗Anti-Human IgE（Cat#209-002-241）以1:3在板上连续稀释，并在室温下孵育1小时。二抗Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (min X Hu, Bov, Hrs Sr Prot)（Cat#115-035-071）以1:20000稀释，孵育1.5小时。加入TMB 30分钟后在620nm处读数。
检测血浆中IgE
Jackson ImmunoResearch抗人IgE与其配对的捕获抗体配合用于夹心法ELISA时具有极好的灵敏度。两种不同的单克隆抗体可以配对使用以进行捕获和检测。在这种情况下，用牛血清白蛋白（Cat#001-000-161，不含IgG与蛋白酶）封闭前，使用未标记的Anti-Human IgE（Clone: ME.10A10，Cat#209-002-244）作为包被抗体，洗涤后，与稀释后的样品一起孵育。选择标记的Anti-Human IgE antibody，例如Alkaline Phosphatase Anti-Human IgE (Cat#209-052-241)，或者Peroxidase Anti-Human IgE (Cat#209-032-241)，接着使用合适的底物或显色技术。图5展示了直接夹心法ELISA验证非偶联的抗人IgE与碱性磷酸酶标记的检测抗体搭配使用来定量检测患者样本中的总IgE。本实验中使用样本的总IgE（kIU/l）已通过罗氏Cobas Total IgE assay检测（结果详见图5的X轴）。
图5. 直接夹心法ELISA检测人血清和血浆样品中的总IgE。用2ug/ml未标记的Anti-Human IgE（Clone: ME.10A10，Cat#209-002-244）包板，100μl/孔，4℃过夜。每孔加入300ul含1%BSA（Cat#001-000-161）的PBS/T（0.05%吐温）封闭1.5小时，随后加入用PBS/T以1:80稀释的样品孵育1小时，100ul/孔。检测抗体，碱性磷酸酶偶联的抗人IgE（Cat#209-055-241），用PBS/T中以1:10000稀释，100ul/孔孵育1小时。每孔加入100ul 新鲜配制的DEA底物孵育30分钟，在405nm处读数。
推荐稀释倍数
下表中的建议稀释倍数用范围表示，因为最佳的稀释度与许多因素有关，如抗原密度，渗透性等。使用者应根据自己的实验来确定抗体最佳的工作浓度。
Conjugate | ELISA | Weatern Blot* | Flow Cytometry |
Uncojugated |
| 10-20 ug/ml |
|
FITC |
| 1:50—1:200 |
|
R-PE |
|
| 1:50—1:200 |
Horseradish Peroxidase | 1:5,000—1:100,000 | 1:5,000—1:100,000 (non-ECL) 1:10,000—1:200,000 (ECL) |
|
Alkaline Phosphatase | 1:5,000—1:50,000 | 1:5,000—1:50,000 |
|
Biotin-SP(using Fluorphore-Conjugates Streptavidin) |
|
| 1:200—1:1,000 |
Biotin-SP(using enzyme-Conjugates Streptavidin) | 1:20,000—1:400,000 | 1:20,000—1:400,000 |
|
*请注意，当检测还原性蛋白质时，该抗体将给出较弱的信号，因此不建议用于需要通过蛋白质印迹检测还原IgE的应用。
参考文献
1. Cox, L., Larenas-Linnemann, D., Lockey, R. and Passalacqua, G., 2010. Speaking the same language: The World Allergy Organization Subcutaneous Immunotherapy Systemic Reaction Grading System. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 125(3), pp.569-574.e7.
2. Pawankar, R., Canonica, G., Holgate, S., and Lockey, R., 2011. World Allergy Organization (WAO) white book on allergy. United Kingdom: WAO.
3. Sánchez-Borges, M., Ansotegui, I. & Cox, L. World Allergy Organization Grading System for Systemic Allergic Reactions: it Is Time to Speak the Same Language When it Comes to Allergic Reactions. Curr Treat Options Allergy 6, 388–395 (2019). https://doi.org/10.1007/s40521-019-00229-8.
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