真核生物中染色质的基本结构单位是核小体,其由146bp的DNA缠绕组蛋白八聚体1.75圈形成。每个核小体又是由两个亚基构成的,而每个亚基包括H2A、H2B、H3和H4这四个组蛋白。组蛋白尾部的蛋白结构域富含带正电荷的碱性氨基酸,能够与DNA中带负电荷的磷酸基团相互作用。其最N末端部分不参与核小体组装,而是从核心结构中突出,更适合与相邻环境进行相互作用,因此易受翻译后修饰(PTM)的影响。在四种不同的组蛋白质中,组蛋白H3和H4的尾部比H2A和H2B更容易发生PTM。
蛋白质翻译后修饰 (PTM) 通过功能基团或蛋白质的共价添加、调节亚基的蛋白水解切割或整个蛋白质的降解来增加蛋白质组的功能多样性。这些修饰包括磷酸化、糖基化、泛素化、亚硝基化、甲基化、乙酰化、脂质化和蛋白水解,几乎影响正常细胞生物学和发病机制的所有方面。组蛋白PTM抗体是表观遗传学研究(如染色质免疫沉淀(ChIP)、免疫染色和免疫印迹)中的关键元素。然而,许多抗体不能特异识别预定目标。此外,目前市面上的组蛋白抗体以多克隆抗体居多,在使用前需要广泛验证。EpiCypher在CUT&RUN和CUT&Tag中筛选了数百种抗体,并通过了独有的SNAP-Certification技术进行验证,为研究者提供了可识别经过修饰的组蛋白和相关细胞靶点的组蛋白PTM抗体。
特异性
准确的CUT&RUN和CUT&Tag分析需要特异性抗体。标准验证方法无法区分特异性与非特异性PTM抗体。即使是被高度引用的抗体也无法满足对靶向分析的最低期望(见下图)。SNAP-Certification抗体的交叉反应性低于20%,确保了精确可靠的数据。
高效性
高效的CUT&Tag和CUT&RUN抗体可以从减少的细胞数中进行可靠的定位。SNAP-Certification抗体经过高效验证,可在细胞滴定中产生可重复的谱图。
SNAP-Certified™抗体具有多重优势: 更优越的靶向特异性和亲和力 交叉反应性低 CUT&RUN和CUT&Tag性能稳定 提高低细胞数的PTM分析 通过特定批次的测试提高可靠性
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