腺相关病毒 (AAV) 是基因治疗中使用最广泛的传递机制。近年来，基于AAV病毒所开发的基因疗法的研发及临床试验注册数量也呈指数级增长。截止本文撰写之时，美国食品和药物管理局已批准五项AAV疗法，也是全球市场上最为昂贵的药物，其中售价最高的Hemgenix®，每剂约为350万美元。由于该疗法每剂量可能需要1011-1016病毒载量，如何实现高效的AAV生产，已成为工艺流程优化中的重要一环。
Mirus成立于1996年，在核酸递送领域深耕多年，TransIT-VirusGEN® GMP 转染试剂支持 AAV及慢病毒(LV)从科研到GMP商业级别生产。不同于传统基于单组分的转染试剂(如阳离子聚合物聚乙烯亚胺，PEI)，Mirus将专利的多聚物及脂质技术进行多重组合，针对不同细胞类型，不同应用场景，有着不同转染方案。
在病毒生产工艺方面，除了需要克服细胞递转过程中的多重阻碍，以实现更高效转染和更低细胞毒性；增强子的加入，可大幅度提升多种血清型AAV病毒生产载量。但Mirus并没有止步于此，为了进一步提高下游生产中的AAV病毒基因组产量， 今年七月底Mirus发布用于AAV生产的RevIT™ AAV Enhancer，可搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 转染试剂或其他品牌转染试剂 (PEI)。基于HEK293悬浮细胞数据，相对于老版本AAV生产，RevIT™ AAV Enhancer可提高AAV基因组滴度1.2-4.9倍，并且便于使用，很容易整合入现有AAV生产工艺工作流程中。Mirus RevIT™ AAV Enhancer的推出，使得AAV上产上游成本进一步降低成为可能，降低了基因治疗单剂量成本。
● RevIT™ AAV Enhancer：可1.2-4.9X提升AAV病毒基因组滴度
平行对比Mirus TransIT-VirusGEN®搭配老版本AAV增强子(VirusGen + Enh 1.0)以及新版本RevIT™ AAV Enhancer (VirusGen + RevIT)，针对不同血清型 AAV2、AAV8、AAV9，AAV基因组滴度分别有着1.6、4.9以及1.2倍提升。除此之外，实验结果显示，在测试的所有血清型中，使用RevIT™ AAV Enhancer也在不同程度上得到更高比例的实心率 (图1)。实验结果表明，在搭配Mirus TransIT-VirusGEN®转染试剂时，可显著提高病毒基因组滴度(GC/mL)及实心率(%Full Capsids)。
✍图1. 在加入RevIT™ AAV Enhancer后，相比Mirus老版本增强子，可1.2-4.9X提升AAV基因组拷贝数，改善AAV病毒实心率。
● RevIT™ AAV Enhancer：具有广泛适配性，可搭配其他品牌转染试剂（PEI），AAV病毒基因组滴度有着显著提升
平行测试两个品牌转染试剂：Polyplus FectoVIR® 病毒转染试剂(“Polymer F”)以及Polyplus PEIpro®病毒转染试剂(“Polymer P”)，在加入Mirus RevIT™ AAV Enhancer，针对不同血清型AAV2、AAV8、AAV9，AAV基因组滴度分别有着1.7-2.0x、1.7-2.2x、2.2-2.3x提升(图2)。实验结果表明，在搭配其他品牌病毒转染试剂时，Mirus RevIT™ AAV Enhancer可显著提高AAV病毒基因组滴度(GC/mL)。
✍图2. “Polymer F”以及“Polymer P”病毒转染试剂，在搭配Mirus RevIT™ AAV Enhancer，针对不同血清型，其AAV病毒基因组滴度都有着显著提升。
● RevIT™ AAV Enhancer：具有广泛的适配性，可适用于不同培养基体系
TransIT-VirusGEN®转染试剂搭配RevIT™ AAV Enhancer，在不同类型病毒生产培养基中，具有很好的兼容性。测试使用293-VP 2.0细胞，搭配培养基类型包括VPM (Thermo Fisher) 及 BalanCD HEK 293 (Irvine Scientific)。实验结果表明，针对不同血清型AAV2、AAV5、AAV8、AAV9，RevIT™ AAV Enhancer在不同培养基实验条件下，AAV病毒基因组滴度提升方面并无显著差异。
✍图3. 更换不同品牌病毒生产培养基，AAV病毒基因组滴度的增加无显著差异。
● RevIT™ AAV Enhancer：实验流程灵活性，不同加入时间窗口有着近似表现
为了进一步确定加入RevIT™ AAV Enhancer可有效提高AAV病毒基因组载量，是否需要严格把控加入时间窗口。平行测试不同加入时间点，包括转染前30或60分钟、转染时及转染后。实验结果显示，相对于对照，在加入RevIT™ AAV Enhancer不同测试时间点， AAV8病毒基因组滴度都有稳步的提升(2倍)，并且病毒实心率稳定保持在相同水平。该组实验结果表明，RevIT™ AAV Enhancer加入时间点的灵活性，一定程度上简化了生产工作流。
✍图4. RevIT™ AAV Enhancer加入时间点的灵活性
● 实验tips：如何进行病毒转染试剂评估？什么是病毒载量？如何检测？
更多详细信息，请查看Technical Resources中Virus Titer Reference Card
➦ 相关产品信息
| 产品名称 | 规格 | 货号 | 链接 |
| RevIT™ AAV Enhancer | 1.5 ml | MIR 8000 | link |
| 10 x 1.5 ml | MIR 8006 |
| VirusGEN® AAV转染试剂及RevIT™ AAV Enhancer | For 1L of Culture | MIR 8007 |
| For 10L of Culture | MIR 8008 |
| TransIT-VirusGEN®转染试剂 | 0.3 ml | MIR 6703 | link |
| 0.75 ml | MIR 6704 |
| 1.5 ml | MIR 6700 |
| 5 x 1.5 ml | MIR 6705 |
| 10 x 1.5 ml | MIR 6706 |
| 30 ml | MIR 6720 |
| TransIT-VirusGEN® GMP级别转染试剂 | 150 ml | MIR 6845-GMP | link |
| VirusGEN® AAV转染试剂(套装) | 1 kit for 1 L of cell culture | MIR 6750 | link |
| VirusGEN® GMP级别AAV转染试剂(套装) | 1 Kit - for 50 L of cell culture | MIR 6815-GMP | link |
| VirusGEN® LV转染试剂(套装) | 1 kit for 1 L of cell culture | MIR 6760 | link |
| VirusGEN® GMP级别LV转染试剂(套装) | 1 Kit - for 50 L of cell culture | MIR 6825-GMP | link |
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