支原体污染是细胞培养中一个主要的污染问题，能够严重影响实验结果的重现性和有效性。InvivoGen公司凭借40多年为科学界开发支原体解决方案的经验，开发了简单可靠的检测细胞培养支原体污染的MycoStrip™试剂盒，基于等温PCR的技术检测支原体污染，在5分钟内就能于免疫层析试纸条上快速显示结果。
支原体属于柔膜菌纲，其成员特征为缺乏细胞壁以及拥有多变的形态。支原体对包括原代细胞在内的所有真核细胞类型具有高度传染性。成百上千的支原体可以附着在一个细胞上，与细胞膜融合、繁殖，最终数量可以超过培养细胞1000倍。支原体没有细胞壁的特点使它们对常用的抗生素（如青霉素和链霉素）产生抗性。 此外，它们的尺寸微小（~100 nm），能够穿透过 0.2 μm 的标准过滤膜。支原体与宿主细胞竞争营养素和代谢物前体，它们能改变许多细胞功能，影响到细胞代谢和细胞生长，最终导致细胞死亡。因此，我们需要采取预防措施来防止细胞培养物受到污染。
目前的支原体检测方法大多费时费力。Japanese cell bank验证了由InvivoGen开发的基于等温PCR的支原体快速检测试剂盒MycoStrip的有效性，并将其检测灵敏度与其他检测方法进行了比较。实验中，将M. hyorhinis支原体(NBRC 14858)加入到VERO细胞(JCRB0111)中进行培养，稀释后的样品分别用MycoStrip、生物发光法(Bioluminescence assay)、荧光染色法(Fluorescent staining)和Nested-PCR进行检测。经证实，MycoStrip的灵敏度与荧光染色的灵敏度相当，显示出足够的检测效率证明了基于等温PCR的MycoStrip是一种简单且高度通用的支原体检测方法，因为该检测方法不需要特殊设备，将试剂与样品混合并滴在试纸上即可轻松快速地获得结果。MycoStrip可普遍用于支原体污染的常规检测。
MycoStrip™ 优势
• 简单：只需要一个加热块
• 快速：2—5分钟内显示结果
• 轻松解读：试纸条上出现一或两条条带
• 最少的操作时间：<15分钟
• 总检测时长：<1小时
• 灵敏度高：检测限低至1 x 102 CFU/ml
• 特异性高：无交叉反应
• 稳定：试剂盒可在-20°C下保存1年
使用MycoStrip™检测支原体
MycoStrip™专门设计用于检测最常污染细胞培养的支原体和无胆甾原体，其中包括导致95%细胞培养污染的六个物种。重要的是，使用MycoStrip™不会与任何其他细菌、真菌或哺乳动物DNA发生交叉反应。
4 个简单步骤检测细胞培养物中的支原体
50 和100 strips的规格还可以提供不带卡壳的形式，更经济、环保。
产品组份
| With cassette | Without cassette |
产品名称 | MycoStrip™ | MycoStrip™ 50 | MycoStrip™ 100 |
产品货号 | rep-mys-10 | rep-mys-20 | rep-mys-50 | rep-mysnc-50 | rep-mysnc-100 |
组分 | 10 Tests | 20 Tests | 50 Tests | 50 Tests | 100 Tests |
• Reaction Mix | 1 vial | 2 vials | 5 vials | 5 vials | 10 vials |
• Reaction Buffer | 1 vial | 2 vials | 4 vials | 4 vials | 8 vials |
• Migration Buffer | 2 vials | 3 vials | 1 bottle | 1 bottle | 2 bottles |
• Positive Control | 1 vial | 1 vial | 1 vial | 1 vial | 2 vials |
• Detection strips | 10 | 20 | 50 | 50 | 100 |
结果示例
常见问题
1. 如果支原体检测呈阳性怎么办？
InvivoGen有解决方案！可以使用InvivoGen全面的抗支原体试剂清除和预防污染。推荐用Plasmocin™ 或Plasmocure™ ，治疗完成后（约2周），使用MycoStrip™重新检测。
2. 收集的待测上清液中含有一些细胞，会干扰检测吗？
无需担心，哺乳动物细胞DNA的存在不会影响检测分析。
3. 样品制备过程中，将样品加热到95°C是否有好处？
敏感度没有提高，但此步骤可以杀死支原体，避免接触活的支原体。
4. 是否每次使用MycoStrip™时都需要设立阳性和阴性对照？
包括阳性和阴性对照的定期监测，对于结果的可靠性以及故障排除很重要。
5.在什么阶段可以冻存样品以供后续检测分析？
可以按照以下方式储存样本：
• 细胞培养上清液：在开始“样品制备”方案之前，可以将上清液储存在-20°C直到需要使用时。使用前，将样品在37°C下完全解冻，涡旋充分混匀以确保所有盐溶解。
• 已制备的样品：执行“样品制备”方案的步骤1-4之后，可以将样品存储在-20°C直至需要使用时。
• 处理过的样品：执行“检测分析”方案的步骤1-4之后，处理过的样品在-20°C下最多保存3个月。
6. 有一个样本的测试带模糊，不能确定是否应将其视为支原体污染的阳性结果？
如果其中一个样品上观察到一条微弱的条带，可以认为这是支原体污染的阳性结果。建议使用以下方法确认此结果：
• 浓缩样品：使用更大体积的上清液并重复“样品制备”方案中步骤2-3。使用MycoStrip™重新检测浓缩后的样品。
• 在使用MycoStrip™重新检测之前，继续培养细胞48小时。
• 使用无菌水（不含核酸酶）替代PBS重悬样品，以提高检测的灵敏度。
7. 实验室中没有热循环仪，可以使用什么代替？
可以使用校准过的加热块或水浴代替。请注意，使用水浴可能会引入新的污染源。
8. 如果将准备好的样品在加热块上放置了一个多小时，是否仍然能使用该样品？
在65°C下孵育40分钟以上会显著影响检测结果，因此不建议继续使用此样品。
MycoStrip™相关产品推荐
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 | 产品说明 |
rep-pt1 | PlasmoTest™ | 1 kit (250 samples) | 细胞比色分析法检测支原体污染 |
pt-ctr2 | PlasmoTest™ Controls | 200 tests | PlasmoTest™试剂盒对照 |
rep-ptrk | PlasmoTest™ Reagent Kit | 500 samples | PlasmoTest™试剂盒补充试剂 |
ant-mpp |
Plasmocin® prophylactic | 25 mg (10 x 1 ml) | 支原体预防试剂 |
ant-mpt | Plasmocin® treatment | 50 mg (2 x 1 ml) | 支原体清除试剂 |
ant-mpt-1 | Plasmocin® treatment | 25 mg (1 x 1ml) | 支原体清除试剂 |
ant-pc | Plasmocure™ | 100 mg (1 ml) | 强效支原体清除抗生素，适合用于带有Plasmocin抗药性支原体 |
InvivoGen于1997年成立于法国，致力于天然免疫相关产品的研发和生产， InvivoGen拥有强大的化学和分子生物学团队，专注于研究和合成基因治疗和疫苗接种领域科研用途的分子和质粒。InvivoGen公司提供各类PRRs（模式识别受体）相关的全套产品，包括PRRs配体（激动剂和拮抗剂）、PRRs诱导剂和抑制剂、报告细胞系、抗体和基因；另外，高纯度的基因筛选抗生素、效果显著的支原体预防和去除抗生素也是InvivoGen的特色产品。
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