InvivoGen开发了一种细胞检测方法以模拟SARS-CoV-2诱导的合胞体（syncytia）。合胞体是在患有严重COVID-19患者的肺部观察到的现象。这套工具透过简单的定量和比色测定法，助您研究Spike-ACE2依赖性细胞融合（cell fusion）。
此测定是依赖转接分子MyD88从'供体细胞'转移到表达了NF-κB诱导性SEAP报告基因'受体细胞'来读数。
•“供体”细胞：293-hMyD88细胞（转染pUNO1-Spike质粒后共表达Spike变异株）
•“受体”细胞：HEK-Blue™ hACE2或A549-Dual™ hACE2-TMPRSS2细胞
共培养“供体”和'受体'细胞会驱动它们的细胞膜发生Spike-ACE2依赖性融合。在'供体'细胞中过表达的MyD88会激活信号级联反应，导致受体细胞产生NF-κB诱导性SEAP。SEAP的活性可使用检测试剂QUANTI-Blue™溶液进行测量。
抗体的中和能力可以用SEAP分泌量的减少来评估。如图所示，
Anti-CoV2RBD-imd-mIgG2a阻断了原始病毒株和P.1变异株的细胞融合，而Anti-CoV2RBD-cas-mIgG2a对相同的P.1变异株的抑制作用较弱。
Fig: Cell fusion inhibition assay. 293-hMyD88 cells were transfected with either the pUNO1-Spike or pUNO1-SpikeV5 plasmid and then incubated with Anti-CoV2RBD-cas-mIgG2a, Anti-CoV2RBD-imd-mIgG2a, or Anti-βGal antibodies. These cells were then co-cultured with HEK-Blue™ hACE2 cells. After overnight incubation, cell fusion was assessed by measuring the activity of SEAP in the supernatant using QUANTI-Blue™ Solution.
相关产品信息
| 货号 | 名称 | 规格 |
293-hmyd | 293-hMyD88 Cells | 3 -7 x 106 cells |
hkb-hace2 | HEK-BlueTM hACE2 Cells | 3 -7 x 106 cells |
a549d-cov2r | A549-DualTM hACE2-TMPRSS2 Cells | 3 -7 x 106 cells |
p1-spike-v’x’-df | pUNO1-SpikeV’X’-dfur | 20 µg |
p1-spike-v’x’ | pUNO1-SpikeV’X’ | 20 µg |
备注：dfur表示inactivated furin site
“x”指 Spike变异株的内部编号，详见下表表格
InvivoGen | PANGO | WHO |
Original | (D614) | - |
V1 | (G614) | - |
V2 | B.1.1.7 | Alpha |
V3 | B.1.351 | Beta |
V4 | B.1.429 | Epsilon |
V5 | P.1 | Gamma |
V6 | B.1.526 | Iota |
V7 | B.1.617.1 | Kappa |
V8 | B.1.617.2 | Delta |
V9 | C.37 | Lambda |
V10 | B.1.621 | Mu |
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