每个Antibody-Oligonucleotide All-in-One Conjugation Kit提供产生一个寡核苷酸标记上抗体结合物所需的所有试剂。该试剂盒要求用户提供抗体(多克隆或单克隆哺乳动物IgG，100ug)和HPLC纯化的3’或5’氨基修饰寡核苷酸(15–25OD 260 units)。通常合成的1umol就能提供足够的氨基寡聚物用于修饰。每个试剂盒可以产生20-60ug的高度纯化、即用型抗体-寡核苷酸缀合物。产量取决于特异性抗体和寡聚物的大小。最终缀合物浓度通常在0.1-0.3mg/ml之间。

图1. Antibody-Oligonucleotide All-in-One Conjugation Kit标记原理

Antibody-Oligonucleotide All-in-One Conjugation Kit被设计成在20-60个核苷酸范围内与氨基修饰的寡核苷酸最佳结合。少于20个核苷酸的寡核苷酸不能与该试剂盒成功结合；可以使用超过60个碱基的寡聚物，但是共轭产率减少。尽管已报道成功使用了超过60个碱基(最多120个碱基)的寡核苷酸，但我们不建议超过试剂盒优化结合的60个碱基限制。该试剂盒已针对25OD 260units寡核苷酸的修饰进行了优化；但是，如果需要，最少可以使用15OD260 units。

适用于这种结合过程的抗体是哺乳动物抗体。非哺乳动物或非免疫球蛋白型抗体不得用于本试剂盒。请确保抗体制剂不含载体分子，如明胶或牛血清白蛋白，因为它们会干扰结合过程。同样，由于这些溶液的粘度增加，高浓度甘油(> 25%)也不合适。小分子胺如Tris或叠氮化钠是可以接受的，因为它们在抗体修饰前在脱盐过程中被除去。

图2. Antibody-Oligonucleotide All-in-One Conjugation Kit 试剂盒标记过程

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