1.要测谁?
确认目标蛋白特性
2.谁去测?
抗体种类
a.单克隆:专一性高,灵敏度较多克隆低
b.多克隆:灵敏度高,批次差异较大
c.重组抗体:批次差异小
抗体验证
3.被谁测?
一抗二抗配对
a.兔配兔,鼠配鼠,一抗二抗想配不出错
b.做免疫组化如一抗宿主种属和样本种属来源相同时,需要注意样本内源性IgG是否与二抗结合产生假阳性
呈色方式
a.HRP,AP呈色
b.荧光(多染时抗体种属或亚型不相同,使用的荧光波长不相近)
二抗专一性
a.使用交叉预吸附型二抗提高抗体专一性
4.在哪测?
做什么应用,用什么抗体
a.环境不同,依应用挑抗体
b.做IP实验时,挑选EasyBlot二抗,去除重轻链干扰
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